里氏木霉双基因同步缺失菌株的构建与甘露聚糖酶表达研究

• 作者: 吴鸿清 秦丽娜 董志扬 陈秀珍 黄建忠
• 来源期刊: 菌物学报
• 关键词: 里氏木霉 纤维素酶基因 甘露聚糖酶基因 同步定点整合
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1281-1291
• 语种: 中文
• DOI: 10.13346/j.mycosystema.140034

摘要

在里氏木霉中建立了一个快速的双基因位点同步同源重组新方法,较好解决了里氏木霉基因逐个敲除周期长等问题.研究以里氏木霉自身甘露聚糖酶基因(man5A)为重组表达的报告基因,通过一步转化,将该基因定点整合入纤维二糖水解酶Ⅰ (cbh1)基因位点,同时缺失主要的两个纤维素酶基因(cbh1、cbh2),得到重组工程菌Man12.将重组工程菌Man12与出发菌株Tu6△ku70进行摇瓶发酵,结果显示,重组菌株的甘露聚糖酶产量比出发菌株提高10倍,而纤维素酶产量降低了60％,胞外总蛋白分泌水平降低了40％.Real-time PCR检测甘露聚糖酶基因(manSA)的转录水平,发现重组菌株较出发菌株提高了25倍.在里氏木霉中首次报道了通过一步转化实现两个基因同步定点整合的方法,对利用基因工程手段构建高效表达重组蛋白的里氏木霉工程菌株具有一定的指导意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄建忠	福建师范大学生命科学学院工业微生物教育部工程研究中心福建省现代发酵技术工程研究中心	125	695	15.0	20.0
2	董志扬	中国科学院微生物研究所	46	1048	16.0	31.0
3	陈秀珍	中国科学院微生物研究所	3	35	2.0	3.0
4	吴鸿清	福建师范大学生命科学学院工业微生物教育部工程研究中心福建省现代发酵技术工程研究中心	1	2	1.0	1.0
5	秦丽娜	中国科学院微生物研究所	4	22	2.0	4.0