小菜蛾U6 snRNA基因的克隆及作为miRNA定量表达分析内参基因的评价

• 作者: 封冰 梁沛 高希武
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小菜蛾 U6 snRNA 定量PCR 内参基因 杀虫剂 miRNA
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 286-292
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

[目的]克隆小菜蛾Plutella xylostella (L.)小分子非编码RNA U6的cDNA序列,并评价其是否适合作为定量检测小菜蛾microRNA (miRNA)表达量的内参基因.[方法]本研究采用RT-PCR克隆获得了小菜蛾4龄幼虫核小RNA (small nuclear RNA,snRNA) U6的cDNA序列,并用定量PCR法检测了U6及8种miRNAs在小菜蛾不同发育阶段及不同杀虫药剂处理后的表达稳定性.[结果]小菜蛾U6的cDNA序列全长94 bp,与其他昆虫U6的核苷酸序列一致性达98.9％.用geNorm和RefFinder软件分析荧光定量PCR结果表明,U6在小菜蛾卵、1-4龄幼虫、蛹和成虫7个不同发育阶段表达稳定;用马拉硫磷、毒死蜱、辛硫磷、灭多威、呋喃虫酰肼、高效氯氰菊酯、氯虫苯甲酰胺、溴虫腈和Bt9种不同作用机理的杀虫药剂处理3龄末幼虫48 h,对U6的表达水平无显著影响.[结论]小菜蛾U6表达水平不受不同发育阶段和不同杀虫药剂处理的影响,符合作为内参基因的基本特点,可作为定量PCR法评价小菜蛾miRNA或其他非编码小分子RNA表达水平的内参基因.研究结果为小菜蛾miRNA表达水平的准确定量奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高希武	中国农业大学昆虫学系	201	3640	32.0	49.0
2	梁沛	中国农业大学昆虫学系	49	885	15.0	29.0
3	封冰	中国农业大学昆虫学系	1	3	1.0	1.0