乙酰氨基葡萄糖转移酶KfiA的共表达与纯化

• 作者: 吴洁 尹鸿萍 沈忱 王杰 王玉峰 王莹 缪小亮 陈向东
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 乙酰氨基葡萄糖转移酶 肝素前体 大肠杆菌 分子伴侣 共表达 纯化
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 393-397
• 页数: 5页
• 分类号: Q55
• 语种: 中文

摘要

在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达并纯化大肠杆菌K5中合成肝素前体的关键酶KfiA,为生物酶法合成肝素提供参考.提取大肠杆菌K5的基因组DNA,用PCR方法扩增目的基因,并将其克隆到表达载体pET-21b中,使用限制性内切酶BamHⅠ和Xho Ⅰ酶切鉴定并进行DNA测序;将该重组表达载体与分子伴侣pGro7共转化大肠杆菌BL21(DE3),用L-阿拉伯糖和IPTG诱导表达,并对不同表达条件下的产物进行SDS-PAGE分析,优化表达条件;采用HisTrap FF琼脂糖凝胶柱对目的蛋白进行亲和纯化,并通过蛋白印迹法鉴定目的蛋白.结果:克隆出KfiA目的基因,构建了融合表达质粒pET-21 b/KfiA; SDS-PAGE检测表明获得了目的蛋白,用HisTrap FF琼脂糖凝胶柱纯化并通过蛋白印迹法确定得到纯度较高的蛋白.为进一步研究生物酶法合成肝素打下基础.