pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞建系的研究

• 作者: 宋九州 左其生 张亚妮 张蕾 施青青 李东 李碧春 汤贝贝 黄晓梅
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: pEGFP-hTERT hTERT基因 BRL-CM 鸡胚胎干细胞
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1253-1259
• 页数: 7页
• 分类号: S831|S814.8
• 字数: 4945字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.08.007

摘要

本研究旨在通过构建重组质粒pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs),优化鸡胚胎干细胞培养体系,以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系.在获得hTERT基因后,构建重组质粒pEGFP-hTERT,并利用FuGENE(@)HD转染鸡成纤维细胞(DF-1),转染24 h后,荧光显微镜检测;再以80％BRL-CM(大鼠肝细胞条件培养基)与20％的ES基础培养液混合的条件培养基培养分离的cESCs,添加10 μmol·L 1维生素C,AKP染色以及相关表面抗原SSEA-1、SOX2和OCT4检测鉴定后,以G418筛选pEGFP-hTERT转染的cESCs,传代培养后荧光定量PCR检测相关干性基因的表达水平.结果表明:维生素C可以促进cESCs增殖,pEGFP-hTERT转染的DF 1细胞中可以检测到绿色荧光表达,pEGFP-hTERT转染的cESCs可持续传至10代以上,且仍保持未分化状态,干细胞表面特异性抗原检测呈阳性,且相关干性基因的表达水平差异不显著(P＞o.05).综上表明:pEGFP-hTERT转染的cESCs在80％ BRL CM结合外源因子的作用下,能够持续稳定传至10代且仍保持未分化状态,可应用于鸡胚胎干细胞的永生化和细胞系建立.