苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒fp25k基因的改造及用于稳定转化Sf9昆虫细胞系

• 作者: 张传溪 谷琳珠
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: AcMNPV fp25k fp25k修饰 转基因昆虫细胞 杆状病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 病理
• 页码范围: 308-314
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

[目的]苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica muhicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)在昆虫细胞中连续传代以后,会出现从多多角体表型到少多角体表型的转变,这种转变与一个编码25 kDa蛋白的基因(few polyhedra,fp25k)突变失活有关.杆状病毒的fp25k基因突变后产生的包涵体(多角体)衍生病毒粒子变少而出芽型病毒粒子增加,会降低外源基因在杆状病毒表达系统中的表达.本研究拟改造fp25k并构建能持续表达FP25K蛋白的转基因昆虫细胞,以克服杆状病毒fp25k基因易突变导致的表达系统缺陷.[方法]本实验通过改造杆状病毒fp25k基因在细胞传代过程中容易产生突变的位点,得到mfp25k,并将mfp25k构建到pIZT/V5-His载体上,重组载体转染Sf9细胞,通过Zeocin抗性筛选逐步淘汰未成功转化的Sf9细胞.[结果]成功改造AcMNPV的fp25k基因的TTAA位点,得到pIZT-mfp25k重组载体.重组载体成功转染Sf9细胞,通过Zeocin抗性筛选后获得基因组中带有mfp25k的Sf9-mfp25k稳定的转基因细胞系.用AcMNPV的fp25k突变型病毒AcP2感染转基因Sf9mfp25k昆虫细胞系与正常Sf9细胞,发现转基因Sf9-mfp25k昆虫细胞系表达的FP25K蛋白可弥补病毒fp25k基因突变的缺陷.[结论]建立的Sf9-mfp25k转基因昆虫细胞系通过细胞表达FP25K蛋白,可以弥补因杆状病毒fp25k基因突变产生的缺陷.研究结果为构建稳定的杆状病毒-昆虫细胞表达系统提供了新途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张传溪	浙江大学昆虫科学研究所	69	719	14.0	23.0
2	谷琳珠	浙江大学昆虫科学研究所	1	0	0.0	0.0