多功能M13KE噬菌体展示系统的建立

• 作者: 方月琴 朱国强 郭娟宁 陆豪杰
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 靶向高通量筛选 噬菌体展示系统 M13KE 长片段多肽库
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 143-147
• 语种: 中文

摘要

以M13KE噬菌体为起始载体,建立一种无需辅助噬菌体的较长片段多肽库展示系统,以解决当前噬菌体展示仅能筛选短肽库现象,并扩大靶向高通量筛选范畴.根据M13KE次要外壳蛋白(Minor coat protein of wild-type M13KE,wt-pⅢ)基因Ⅲ(wt-gene Ⅲ)结构与功能关系,设计并扩增出能发挥其基因功能的截短基因Ⅲ(Truncated gene Ⅲ,tgⅢ);通过拼接-重叠-延伸PCR(Splice-overlapping-extension polymerase chain reaction,SOEing-PCR)获得含启动子、信号肽和结构基因的融合基因片段,将其插入至M13KE载体的合适部位,进行蛋白质诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析.同时在wt-gⅢ和tgⅢ部位分别插入HA和c-Myc多肽标签,再次进行表达和检测.结果显示,tgⅢ被插入到M13KE的非必需部位,利用抗蛋白Ⅲ(anti-M13 pⅢ)抗体进行Western blot检测发现,wt-gⅢ和tgⅢ均能表达pⅢ(protein Ⅲ,pⅢ);anti-HA和c-Myc抗体都能检测到2个标签蛋白和pⅢ蛋白质的表达.获得一种多功能M13KE载体,具有既能表达短片段多肽库,也能表达较长片段多肽库的潜能,而且无需辅助噬菌体,可用于更大范围的高通量靶向筛选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方月琴		2	0	0.0	0.0
2	郭娟宁	扬州大学兽医学院	1	0	0.0	0.0
3	陆豪杰		1	0	0.0	0.0
4	朱国强		1	0	0.0	0.0