鱼类传染性造血器官坏死病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用

• 作者: 冯剑 刘淼 刘红柏 卢彤岩 尹家胜 张金凤 徐黎明 曹永生 赵景壮
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性造血器官坏死病毒(IHNV) 聚合酶蛋白 RT-LAMP 可视化检测
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1065-1071
• 页数: 7页
• 分类号: S941
• 字数: 4112字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2014.01065

摘要

将逆转录环介导的等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)引入到鱼类的传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)检测中,建立了简单、快速、灵敏的IHNV检测方法.针对IHNV的聚合酶蛋白基因(polymerase protein,L)设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶和BstDNA聚合酶的作用下进行RT-LAMP,反应产物添加SYBR Green Ⅰ荧光染料后,肉眼观察阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本表现为红棕色.2％琼脂糖凝胶电泳检测结果与可视化检测结果一致.该方法实现了检测结果的可视化.特异性分析显示该方法不与传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)及病毒性出血性败血症病毒(viral haemorrhagic septicaemia virus,VHSV)发生交叉反应,并且可检测不低于10 pfu的IHNV RNA.本研究所建立的IHNV RT-LAMP可视化检测方法具有灵敏度高、特异性好、成本低、不依赖任何专门的仪器设备的优点,其检测结果直观可视化,可实现现场高通量快速检测.