山羊不同组织及不同发育时期骨骼肌内参基因的表达稳定性分析

• 作者: 仲涛 占思远 张红平 李丹 李利 王林杰 赵薇 陈利
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 荧光定量PCR 内参基因 表达稳定性
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1228-1236
• 页数: 9页
• 分类号: S827|Q786
• 字数: 5237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.08.004

摘要

为筛选出山羊不同组织、不同时期骨骼肌及骨骼肌卫星细胞(Skeletal muscle satellite cells,SMSCs)中稳定表达的内参基因,以出生后3日龄的山羊不同组织(心、肝、脾、肺、肾、大脑、大肠、小肠、背最长肌、臂三头肌和半膜肌)和不同时期(3、30、60、90和120 d)的3种骨骼肌(背最长肌、臂三头肌和半膜肌)以及培养至不同阶段(1、3、4和7 d)的山羊SMSCs为研究对象,运用qRT-PCR技术及geNorm分析软件,探索9个内参基因(ACTIN、GAPDH、TOP2β、YWHAZ、SDHA、PGK1、RP2、RPL4和HPRT1)mRNA的表达稳定性.结果表明,在同一时期的11个组织中,内参基因表达稳定度的排序:HPRT1＞ RP2＞TOP2β＞SDHA＞ GAPDH＞ACTIN＞ YWHAZ＞PGK1＞RPL4,需要2个内参基因(HPR T1和RP2)共同校正目的基因的表达;在不同发育时期的骨骼肌中,各内参的稳定度:YWHAZ＞ACTIN＞ HPRT1＞RPL4＞TOP2β＞SDHA＞PGK1＞GAPDH＞RP2,需引入3个内参(YWHAZ、ACTIN和HPRT1)才能准确地校正定量结果;在SMSCs中各内参表达的稳定度排序:PGK1＞SDHA＞ACTIN＞RPL4＞ GAPDH＞ TOP2β＞YWHAZ＞RP2＞ HPRT1,需要3个合适的内参(PGK1、SDHA和ACTIN)作为标准化指标校正定量数据.本试验分别筛选出了能在山羊同一时期不同组织、不同发育时期的骨骼肌及SMSCs中稳定表达的内参基因及需要引入的内参数目,有利于更加准确地校正基因mRNA水平的表达量,为更好地研究基因功能奠定了基础.