抗PAI抑制作用的纤溶酶原激活剂突变体的活性研究

• 作者: 占志 朱美财 李忠培 李飞 王冬雪
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 组织型纤溶酶原激活剂 突变体 蛋白表达 纯化 酶动力学
• 年，卷（期）: 2014,（16）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3029-3032,3037
• 分类号: Q78|R446
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2014.16.008

摘要

目的:重组表达抗PAI抑制作用的t-PA突变体,经诱导表达、复性、纯化后进行生物学活性和酶动力学分析.方法:构建pBV220-tpa重组表达质粒,经DNA测序确认后,转化至大肠杆菌DH5a,温控诱导表达,凝胶过滤法对包涵体蛋白进行初步纯化,复性后,过刺桐胰蛋白酶亲和层析柱纯化,酶动力学分析其活性.结果:测序证实,t-PA突变体的DNA序列正确,表达蛋白占总菌体蛋白的30％,经纯化后纯度达90％以上,比活性为7.0× 108IU/mg,t-PA突变体与PAI-1反应后,其活性未受到抑制.t-PA突变体酶的米氏常数Km为0.5298,最大水解速度Vmax为0.0595.结论:经生物学活性测定,表达蛋白能够明显抵抗PAI的抑制作用,并具有良好的生物活性,该突变体有可能成为用量更少、疗效更佳的新型溶栓药物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王冬雪	中国人民解放军空军总医院临床检验中心	8	24	3.0	4.0
2	李忠培	泰安市中心医院检验科	7	17	3.0	3.0
3	朱美财	中国人民解放军空军总医院临床检验中心	7	7	2.0	2.0
4	占志	中国人民解放军空军总医院临床检验中心	3	5	1.0	2.0
5	李飞	泰安市中心医院检验科	1	0	0.0	0.0