铁皮石斛丙酮酸激酶基因的克隆与表达分析

• 作者: 张大为 张岗 张琳 蔡茜 郭顺星
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 铁皮石斛 丙酮酸激酶 基因克隆 表达分析 生物信息学
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 990-995
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.07.018

摘要

目的 克隆珍稀濒危药用植物铁皮石斛丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)基因(DoPK),并进行生物信息学分析以及检测基因在不同器官中的表达情况.方法 采用RACE技术获得基因的全长cDNA;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域及亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助r实时荧光(real-time quantitative) PCR (RT-qPCR)分析基因在不同器官中的表达情况.结果 克隆获得DoPK(GenBank注册号KC178572)的cDNA全长1 895 bp,编码一条由511个氨基酸组成的多肽,相对分子质量为55 040,等电点7.00;DoPK基因与江南卷柏、拟南芥、马铃薯和葡萄等植物的PK基因有71％、86％、89％和91％的相似性;DoPK蛋白包含保守的丙酮酸激酶结构域(21～497)和活性位点(235～247);DoPK属于胞质型的CYTOSOLIC-1亚类,与单子叶植物亲缘关系较近;DoPK基因为组成型表达,其转录本在石斛茎中的相对表达量较高,为叶中的2.29倍,根中次之,为叶中的1.28倍.结论 克隆了胞质型的铁皮石斛DoPK基因的全长cDNA序列,为进一步研究其在铁皮石斛生长发育中的作用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭顺星	中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所	146	2845	28.0	48.0
2	张大为	中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所	24	172	8.0	12.0
3	张琳	陕西中医学院药学院陕西省中药基础与新药研究重点实验室	32	129	7.0	10.0
4	张岗	陕西中医学院药学院陕西省中药基础与新药研究重点实验室	41	128	7.0	10.0
8	蔡茜	陕西中医学院药学院陕西省中药基础与新药研究重点实验室	1	5	1.0	1.0