人乳头瘤病毒18型L1蛋白的包涵体和可溶性表达及纯化

• 作者: 张骞 郑丽舒 麻粉莲
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人乳头瘤病毒18型L1蛋白 包涵体 可溶性蛋白 纯化
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 800-803
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3932字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.06.011

摘要

目的：原核表达系统表达人乳头瘤病毒18型（HPV18）L1蛋白，建立包涵体和可溶性表达的L1蛋白的纯化方法。方法：构建重组表达质粒pGEX-4T-1-HPV18 L1，在大肠杆菌BL21中以包涵体和可溶性方式表达HPV18 L1蛋白。通过超声波破碎菌体、洗涤包涵体、碱变性、透析复性和谷胱甘肽（GST）琼脂糖凝胶4B亲和层析纯化包涵体蛋白；在菌体中加入三磷酸腺苷（ATP）和3.5 mol/L尿素孵育后，GST 4B亲和层析纯化可溶性蛋白，凝血酶酶切。SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达和纯化产物。结果：SDS-PAGE结果表明，HPV18 L1蛋白以包涵体和可溶性方式在大肠杆菌BL21内高效表达，均产生相对分子质量约为86000的HPV18 L1-GST融合蛋白。Western印迹结果显示，包涵体纯化后获得的融合蛋白降解条带较多；而可溶性蛋白纯化后获得的融合蛋白未降解，凝血酶酶切后得到HPV18 L1蛋白，可与HPV18 L1蛋白单克隆抗体结合。结论：采用原核系统表达了HPV18 L1-GST融合蛋白，分别建立了包涵体和可溶性蛋白的纯化方法，获得HPV18 L1蛋白，为其进一步应用奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张骞	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	15	118	4.0	10.0
2	郑丽舒	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	25	84	5.0	8.0
3	麻粉莲	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	12	17	2.0	3.0