In-Fusion克隆技术构建HBVX基因真核表达质粒

• 作者: 刘永兰 向安 王鹏 郭晏海 郭瑞娟 雷小英
• 来源期刊: 现代仪器与医疗
• 关键词: 乙型肝炎病毒 HBVX基因 基因克隆 表达载体 真核表达
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R511
• 语种: 中文
• DOI: 10.11876/mimt201402001

摘要

目的：以血清中乙型肝炎病毒（HBV）DNA为模板，克隆构建HBV X蛋白质的真核表达载体pcDNA-HBx。方法：设计扩增HBV X基因的In-Fusion PCR引物，采用高保真DNA聚合酶分两段扩增HBV X基因序列；采用In-Fusion克隆技术，将两段X基因扩增片段一步克隆入经Hind III和Xba I双酶切的pcDNA3.0真核表达载体，以构建重组真核表达载体pcDNA-HBX；采用Hind III和Xba I双酶切和DNA序列测序筛选鉴定重组载体；pcDNA-HBx转染HepG2细胞，Western blot检测pcDNA-HBx转染细胞的HBx蛋白质表达。结果：In-Fusion PCR引物分两段扩增获得全长HBx基因序列；In-Fusion获得克隆的pcDNA-HBx经双酶切筛选得到阳性重组质粒，测序分析证实插入序列正确；转染pcDNA-HBX的HepG2细胞， Western blot证实表达HBx蛋白质。结论：以血清HBV DNA为模板克隆HBV X基因，构建了表达HBV HBx蛋白质的真核表达载体，为HBx蛋白质的生物学功能研究提供支持。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王鹏	第四军医大学药学院	46	190	8.0	10.0