抗菌肽Plectasin原核表达条件的正交试验优化研究

• 作者: 朱哲 李凌 温耀安 石羽 郭松文 陈新
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗菌肽 菌丝霉素 原核表达 融合蛋白 正交试验 条件优化
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 424-428
• 页数: 5页
• 分类号: Q516|Q81
• 语种: 中文

摘要

为提高重组抗菌肽Plectasin的表达量,对构建的Plectasin重组表达载体pE-SUMO-PS的表达条件进行正交试验优化.根据Plectasin氨基酸序列合成了Plectasin基因,通过限制性内切酶Xba Ⅰ和BsaⅠ插入表达载体pE-SUMO中,转化E coli Origami(DE3),IPTG诱导表达.选取诱导时间,诱导浓度和诱导温度共3个主要外部因素.采用3因素3水平正交试验设计,通过SDS-PAGE测定重组表达蛋白.以标准SDS-PAGE图法分析目的融合蛋白含量,以单位上清体积内融合蛋白量作为检测指标,结果用SPSS13.0软件进行统计分析.实验成功构建了重组表达载体pE-SUMO-PS,且融合蛋白主要是以可溶性蛋白为主.在30℃,0.05 mmol/L IPTG的条件下诱导6h所得融合蛋白量最大.影响抗菌肽Plectasin融合表达的因素的强度由高到低分别为诱导温度、诱导时间及诱导剂浓度.通过正交试验得出抗菌肽Plectasin原核表达的最佳诱导条件为30℃,6h和0.05 mmol/L IPTG.这对于抗菌肽Plectasin的后续纯化及产业化具有重要参考价值.