海岛棉纤维发育相关基因GbPDF2酵母单杂交文库构建及其上游基因解析

• 作者: 丁明全 代华琴 戎均康 曹跃芬 李金娟 郑云娜
• 来源期刊: 棉花学报
• 学科: 农学
• 关键词: 棉花纤维 基因功能 酵母单杂交 SMART技术 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究与进展
• 页码范围: 204-212
• 页数: 9页
• 分类号: S562.035
• 字数: 5559字
• 语种: 中文

摘要

为研究棉纤维起始发育的分子调控网络,以海岛棉(Gossypium barbadence L.)品种“海渝”开花当天(0 DPA)胚珠为实验材料,利用酵母单杂交技术来筛选棉纤维起始发育相关基因GbPDF2的上游调控转录因子.首先,克隆GbPDF2的启动子(Accession:KJ475468);构建了该启动子的诱饵融合载体(GbPDF2-PRO)-pAbAi,转入酵母细胞中重组为Y1HGold [Bait-pAbAi]菌株.之后,应用Matchmaker Gold Yeast One-Hybrid Library Screening System系统构建酵母单杂交cDNA文库,转化重组酵母菌株,通过同源重组筛选GbPDF2的上游转录调节因子.构建的cDNA文库库容为2.23× 106,重组率为95.8％,插入片段大小为300 bp～2000 bp,其中大于1000 bp的阳性克隆为109个.cDNA插入片段经测序和Blast同源性分析,筛选出2个生长素响应因子,1个WRKY7转录因子,1个WD-repeat protein 40等与纤维发育相关的转录调节因子,为研究棉纤维起始发育的信号转导通路奠定了基础.