大豆过氧化物酶在毕赤酵母中功能表达

• 作者: 林剑辉 石艺平 胡美荣 陶勇 黄建忠
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 大豆过氧化物酶 毕赤酵母 去糖基化
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 1850-1855
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.140232

摘要

[目的]大豆过氧化物酶(SBP)作用底物广泛、比活高、热稳定性好,使其在免疫检测、工业污染废水处理领域有着广泛的应用潜力.现有的生产方法主要是从大豆壳中提取,这种方法产量低,成本高,远不能满足于工业应用要求,本研究希望实现在毕赤酵母中高效表达有功能活性的大豆过氧化物酶.[方法]将大豆过氧化物酶基因以及C末端截短20个氨基酸的基因克隆pPIC-9K载体中,并在毕赤酵母X-33中诱导表达.同时还将糖基化位点的天冬酰胺突变成为谷氨酰胺,研究糖基化位点对表达的影响.[结果]全长SBP在毕赤酵母中表达是无活性的,只有截短的SBP△20在试管发酵的表达活力达23.5 U/mL,经过糖基化位点的突变表明130、144、185、197对酶活非常重要,不能突变;211和216位点去糖基化突变对酶活有所提高.[结论]经过发酵条件的优化,在5L的发酵罐中发酵液上清最高酶活力达510U/mL,是目前报道的最高水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄建忠	福建师范大学生命科学院	125	695	15.0	20.0
2	陶勇	中国科学院微生物研究所	49	311	9.0	16.0
3	胡美荣	中国科学院微生物研究所	12	54	5.0	6.0
4	林剑辉	福建师范大学生命科学院	2	9	1.0	2.0
5	石艺平	福建师范大学生命科学院	2	9	1.0	2.0