悬浮培养诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞的研究

• 作者: 伯平 张健群 李献帅 穆军升 袁树民
• 来源期刊: 心肺血管病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人胚胎干细胞 分化 心肌细胞 悬浮法
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 93-97
• 页数: 5页
• 分类号: R54
• 字数: 4900字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5062.2014.01.024

摘要

目的:利用不加任何诱导剂的悬浮培养法,体外诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞并检测其分化效率.方法:人胚胎干细胞克隆用200U/mL胶原酶Ⅳ,37℃处理10min后,挑起克隆碎片转移到低黏附性培养皿中悬浮培养以形成EB(拟胚体),4d后将EB转移到基质胶处理过的6孔板中贴壁培养(1-3EBs/cm2),显微镜下观察记录出现跳动心肌细胞的时间和跳动频率,并计算跳动克隆百分比,24孔板一组,共记录4组96孔;免疫荧光染色检测心肌细胞特异标志物cTnT;膜片钳实验检测心肌细胞自发性动作电位;跳动心肌细胞经过24h缺氧刺激后,用凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡比例.结果:在悬浮培养14d左右开始出现大量的自发跳动心肌细胞,分化出现自发跳动心肌细胞的平均时间(13.9±0.9)d,百分比为20.8％,平均跳动频率为(63.8±5.6)次/min;跳动心肌细胞cTnT染色阳性;跳动心肌细胞检测到自发性动作电位;跳动心肌细胞缺氧24h的凋亡比例为(8.1±0.4)％.结论:不加诱导剂的悬浮培养可以诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞,分化效率达到20.8％,分化时间14d左右.为进一步的干细胞移植治疗动物心肌梗死模型提供种子细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁树民	中科院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室	3	8	1.0	2.0