红罗非鱼Na+-K+-ATPase α基因的克隆及其在不同盐度条件下mRNA表达差异

• 作者: 吴灶和 周晖 张健东 施钢 汤保贵 潘传豪 王忠良 陈刚 黄建盛
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 红罗非鱼 Na+-K+-ATPase α基因 cDNA末端快速扩增 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 137-145
• 语种: 中文

摘要

为获知红罗非鱼(Oreochromis sp.)Na+-K+-ATPase α基因的全长分子结构及其在不同盐度条件下的表达情况,采用同源克隆及cDNA末端快速扩增(RACE-PCR)方法,首次在红罗非鱼鳃组织中克隆到了全长为3 379 bp的Na+-K+-ATPase α基因全长cDNA序列,该序列包含3 072bp的开放阅读框(ORF),143 bp的5’末端非编码区(UTR)和164bp的3’末端非编码区(UTR),编码1023个氨基酸,预测分子量为112.5 kD,理论等电点为5.26.BLAST分析显示红罗非鱼Na+-K+-ATPase α基因编码的氨基酸序列与其它已知物种相应基因编码的氨基酸序列的同源性达到97％-99％;系统进化分析显示,红罗非鱼Na+-K+-ATPase α亚基与萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron)和莫桑比克罗非鱼(Oreochromis mossambicus)亲缘关系较近.应用Real-time PCR技术,以β-actin基因为内参,对不同盐度(0、15、25、32 g/L)务件下鳃组织中Na+-K+-ATPase α基因的表达情况进行了比较分析,结果表明,当盐度为25g/L时,Na+-K+-ATPase α基因的表达量达到峰值,而盐度升至32g/L时,其表达量呈下降趋势;各盐度处理组中,养殖12h后Na+-K+-ATPase α基因的mRNA表达量显著上升(P＜0.05)并达到最高;随着养殖时间的延长,24h后该基因mRNA表达量开始降低,但仍然显著高于对照组的表达量值(P＜0.05).