同位素稀释超高效液相色谱串联质谱法快速测定血清25-羟维生素D2和25-羟维生素D3临床方法的建立

• 作者: 张殿喜 张江涛 禹松林 程倩 苏薇 邱玲 陈雨 韩建华
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 25-羟维生素D2 骨化二醇 色谱法,高压液相 串联质谱法 同位素
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 617-622
• 页数: 6页
• 字数: 5290字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.08.014

摘要

目的 建立同位素稀释超高效液相色谱串联质谱(ID-UPLC/MS/MS)方法测定血清25羟维生素D2[25(OH)D2]和25羟维生素D3 [25(OH) D3],以用于常规临床实验室评价维生素D含量.方法 方法学建立及评价.2013年5月至8月征集的500名北京健康志愿者,采集血清用于建立参考区间.以稳定同位素标记的25 (OH) D2-D3和25 (OH) D3-D3作内标,首先用硫酸锌溶液和甲醇溶液沉淀血清蛋白、正己烷震荡提取、离心后吸取上清液、氮气挥干,再用流动相重组,应用ID-UPLC/MS/MS技术分析;质谱采用正离子电喷雾离子化的多离子反应监测模式,25(OH) D2和25(OH)D3定量离子通道选择质荷比(m/z)分别为413.3→395.3和401.4→383.4;内标25(OH) D2-D3和25 (OH) D3-D3离子通道m/z分别为416.3→398.3和404.4→386.4.以标准品制作标准曲线,结合稳定同位素内标法定量,建立ID-UPLC/MS/MS法快速测定25(OH)D2和25(OH)D3的方法.用含4个水平25(OH)D3的混合人血和3个水平25 (OH) D2和25(OH)D3的质控品进行3次重复分析,每次每种样本重复分析3份,以考察方法的精密度,同时评价血清样本添加不同浓度标准品的加样回收率.初步建立北京人群血清25(OH)D参考范围,亚组间差异采用独立样本t检验.结果 用ID-UPLC/MS/MS法在本实验条件下可同时快速检测血清25(OH)D2和25(OH) D3,分析时间仅4.5min,特异性高,未见明显干扰因素.25(OH)D2[或25 (OH) D3]/内标峰面积比与对应的浓度线性相关系数＞0.999,25(OH) D2批内和总变异分别为1.89％ ～4.19％和2.58％ ～ 7.90％,25(OH)D3批内和总变异分别为1.51％～2.86％和1.89％ ～ 3.26％.25(OH) D2和25 (OH) D3三次试验的加样回收率范围为98.12％ ～103.11％和98.00％ ～ 103.40％.25 (OH) D2和25 (OH) D3检测限(LOD)均为0.39 ng/ml,定量限(LOQ)分别为1.25 ng/ml和1 ng/ml,具有较高的灵敏度.结论 本研究成功建立了ID-UPLC/MS/MS同时测定血清25 (OH) D2和25(OH) D3的方法,该法可应用于常规临床实验室评价维生素D含量.

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1	张江涛		2	33	2.0	2.0