HeLa细胞中Zwint-1选择剪接亚型v7的表达鉴定

• 作者: 代剑平 刘俊 周艳琳 李康生 李蕊 王革非 苏景华 陈小璇
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 生物学
• 关键词: HeLa细胞 Zwint-1v7蛋白 原核表达 多克隆抗体制备
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 117-122
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5010字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2014.02.008

摘要

目的：验证在HeLa细胞系中是否存在Zwint-1 v7选择性剪切亚型的mRNA和蛋白产物。方法：在缺失片段两侧设计引物，利用PCR和克隆测序验证HeLa细胞中是否存在缺失片段的mRNA；构建Zwint-1 v73′端特异区段(Z7)的GST融合表达载体pGEX-KG-GST-Z7，转化入BL21菌种诱导表达，菌体经超声破碎和2 mol/L尿素洗涤纯化，融合蛋白经SDS-PAGE电泳并切胶回收后作为抗原与佐剂混合乳化并免疫C57BL/6小鼠，收获多克隆抗血清Anti-Z7，采用Dot blot检测多克隆抗体的效价，Western blot检测HeLa细胞全蛋白中的Z7蛋白产物。结果：PCR和测序结果表明存在缺失37 bp的核酸片段；SDS-PAGE电泳显示在30.7 kDa处出现明显的蛋白条带；Dot blot结果表明1∶5000稀释的多克隆抗体能检出12 ng GST-Z7；Western blot结果表明，1∶200稀释的多克隆抗体可识别HeLa细胞中Zwint-1 v7蛋白。结论：本研究在核酸水平和蛋白水平初步验证了HeLa细胞中存在Zwint-1v7。