家蚕膜蛋白基因BmMFS的组织表达特征和重组蛋白的表达

• 作者: 于威 吕正兵 张耀洲 盛稳稳 舒特俊 郭庆拓 陈剑清
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 家蚕 膜蛋白 主要协助转运蛋白超家族 杆状病毒多角体蛋白 融合表达
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 396-403
• 页数: 8页
• 分类号: S881.2|Q786
• 语种: 中文

摘要

膜蛋白在生物体内承担细胞内外环境物质和能量的交换及信息传递,也是药物设计的靶标.在家蚕蛋白质数据库中筛选到一个含有6个跨膜区的膜蛋白,包含一个主要协助转运蛋白超家族(MFS)的保守结构域,将该蛋白质的编码基因命名为BmMFS.荧光定量PCR检测家蚕5龄幼虫不同组织中的BmMFS转录水平存在明显差异,在中肠中的转录水平最高,在气管中的转录水平最低.以家蚕蛹cDNA为模板扩增BmMFS片段,构建重组质粒pET-32a-Ph20-BmMFS,在Ph20和BmMFS序列之间引入凝血酶(thrombin)酶切位点;转化E.coli Rosetta,以1 mmol/L IPTG诱导融合基因表达,菌液调节pH初步纯化后进一步通过镍柱亲和层析纯化目的蛋白质,经Western blotting和质谱鉴定获得的融合蛋白为Ph20-BmMFS;进一步利用家蚕杆状病毒表达系统构建重组病毒(vPh20-BmMFS)并感染BmN细胞,Western blotting检测显示融合BmMFS蛋白成功表达.将家蚕膜蛋白基因与家蚕杆状病毒多角体蛋白基因片段Ph20融合表达,提高了膜蛋白在原核和真核表达系统中的表达量,利用该多角体蛋白能在较低pH条件下溶解的特性简化了融合蛋白纯化过程.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于威		42	78	4.0	7.0
2	张耀洲		87	372	9.0	15.0
3	吕正兵		46	82	6.0	7.0
4	陈剑清		13	12	1.0	3.0
5	舒特俊		10	5	1.0	2.0
6	盛稳稳		2	0	0.0	0.0
7	郭庆拓		2	0	0.0	0.0