尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）cyp19a1a原核表达与蛋白纯化

• 作者: 季相山 春根 王慧 王艺雅 王金 赵燕
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 cyp19a1a 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 分类号: S917
• 字数: 5062字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11758/yykxjz.20140407

摘要

为表达和纯化尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a蛋白，本研究从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA，反转录获得cDNA模板后，利用设计的引物PCR扩增cyp19a1aORF区1200 bp片段，双酶切后连接到 pET-28a(＋)表达载体上，经酶切验证和 DNA 测序鉴定，证明成功构建了pET-28a-cyp19a1a原核表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌(E.coli) BL21中，优化IPTG诱导浓度和诱导时间。结果显示，在0.5 mmol/L IPTG诱导8 h后，cyp19a1a重组蛋白大量表达，并以包涵体形式存在。通过 Ni2+-NTA 层析柱和切胶纯化，获得与预期片段大小一致的表达蛋白，并用Western blotting验证了纯化的蛋白为目的蛋白。本研究为制备cyp19a1a抗体和研究高温对cyp19a1a蛋白表达的影响提供了重要的基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王慧	山东农业大学动物科技学院	141	1082	15.0	27.0
2	季相山	山东农业大学动物科技学院	37	299	9.0	16.0
3	王艺雅	山东农业大学动物科技学院	2	1	1.0	1.0
4	赵燕	山东农业大学动物科技学院	25	165	8.0	12.0
5	春根	南昌大学生命科学学院	4	6	2.0	2.0
6	王金	南昌大学生命科学学院	2	1	1.0	1.0