利用蛋白标签纯化酿酒酵母RAVE V1复合物

• 作者: 张震宇 顾春银
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: 酿酒酵母 V ATP 酶 亲和层析 同源重组 蛋白标签
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 34-38,68
• 页数: 6页
• 分类号: Q291
• 字数: 4031字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2014.05.006

摘要

RAVE（ regulator of the H＋-ATPase of the vacuolar and endosomal membranes）是调节液泡ATP酶（ V ATP酶）装配与拆卸过程的调节酶，由Rav1p、Rav2p和Skp1p 3个亚基构成。在酿酒酵母细胞中，当葡萄糖耗尽时，V ATP酶分解成V1、V0两部分，此时，RAVE与V1以复合物的形式存在于细胞质中。本研究利用同源重组技术，构建在基因RAV2的3′端定点插入FLAG标签的重组菌株BY4742 RAV2 FLAG，通过亲和层析原理纯化RAVE V1复合物，为后续利用电子显微镜对其进行三维结构研究奠定坚实的基础。结果表明：FLAG标签添加到Rav2p的C端可以成功纯化出RAVE V1复合物；结合质谱鉴定首次发现了Leu1p与RAVE存在相互作用关系，这使得对RAVE的研究转向一个全新的方向；此外，本研究方案对其他调节蛋白及与之相互作用的蛋白组的分离纯化具有借鉴意义。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张震宇	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	18	41	3.0	6.0
2	顾春银	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	1	1	1.0	1.0