流式细胞术检测中性粒细胞膜碱性磷酸酶方法的建立

• 作者: 吴惠毅 张春燕 张欢欢 杨晋 赵绍林 郑萍
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 中性白细胞 细胞膜 碱性磷酸酶 流式细胞术 感染
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 623-627
• 页数: 5页
• 字数: 4102字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.08.015

摘要

目的 建立流式细胞术检测中性粒细胞膜碱性磷酸酶(mNAP)表达.方法 方法学建立.采集研究对象乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉血,应用PE标记抗碱性磷酸酶单克隆抗体,建立流式细胞术检测外周血mNAP表达方法.运用BD公司QuantiBRITETM PE于流式细胞术评估每个细胞结合的抗体数(AB/c),间接反映待测细胞mNAP的表达量.观察肝素、乙二胺四乙酸二钾、柠檬酸钠3种抗凝剂、标本放置温度、时间以及血浆中碱性磷酸酶对结果的影响,评价方法精密度.用所建方法检测481名健康人群外周血mNAP表达水平,对数据进行正态性检验,确立临床参考区间.检测84例重症感染和局部感染患者和39例病毒感染患者外周血mNAP表达水平.结果 标本检测前,应用磷酸盐缓冲液洗涤可以有效消除血浆中碱性磷酸酶(ALP)干扰.3种不同抗凝剂采集的标本对mNAP检测结果无影响.标本放置室温或4℃12 h内对检测结果无影响.精密度实验结果,批内变异系数(CV) 2.01％ ～3.33％,平均CV 2.67％;批间CV 5.80％ ～6.00％,平均CV5.90％.健康成年人无论男女,mNAP表达水平均呈非正态分布.男、女中位数(P25,P75)分别为1 758(1 378 ～2 310) AB/c、1 897(1 369 ～3 249) AB/c,性别之间差异无统计学意义(U=27 140,P=0.243 8).以2.5％ ～97.5％位数作为临床参考区间,结果为920.5 ～3 493.0 AB/c.细菌感染患者外周血中mNAP表达水平13 532(9 756 ～ 16 869) AB/c高于病毒感染患者1 143(536～2 012)AB/c以及健康对照人群1 879(1 399 ～2 497) AB/c(H=221.5,P＜0.01).结论 应用QuantiBRITETM PE试剂盒来标准化流式细胞仪的设置,可定量分析待测样品荧光强度,进而获得细胞所含荧光素分子数,并计算出每个细胞表达的抗原位点或抗原分子数目,从而达到定量检测的目的.应用流式细胞术检测外周血中mNAP,操作简便、快速、结果准确,mNAP表达对于鉴别细菌、病毒感染具有重要的临床价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴惠毅	连云港市第一人民院中心实验室	40	205	9.0	12.0
2	杨晋	连云港市第一人民院中心实验室	45	210	9.0	12.0
3	赵绍林	连云港市第一人民院中心实验室	34	147	7.0	9.0
4	郑萍	连云港市第一人民院中心实验室	19	92	6.0	8.0
5	张欢欢	连云港市第一人民院中心实验室	14	48	3.0	6.0
6	张春燕		1	10	1.0	1.0