骨形态发生蛋白4／Smad 信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控作用

• 作者: 张晓丽 张海玉 纪淑芳 邴鲁军 郝晶
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白4/Smad信号通路 卵母细胞 Sohlh2 原位缺口末端标记 免疫组织化学 小鼠
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 组织学胚胎学发育生物学
• 页码范围: 375-382
• 页数: 8页
• 分类号: R321.1
• 字数: 6260字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-1356.2014.03.015

摘要

目的：探讨骨形态发生蛋白（BMP）4/Smad 信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控作用。方法取出生3d的雌性昆明小鼠卵巢，采用两步酶消化法，分离纯化卵母细胞，进行原代培养。将卵母细胞分为3组：正常对照组（ Con组）、添加重组人BMP4组（ BMP4组）、添加BMP4和BMP4抑制剂6-｛4-[2-（1-呱啶基）乙氧基]苯基｝-3-（4-吡啶基）吡唑并（1，5-A）嘧啶（dorsomorphin）组（BMP4＋抑制剂组）。采用TUNEL法，检测BMP4对卵母细胞凋亡的影响；采用免疫组织化学染色与实时定量PCR，检测BMP4对卵母细胞中p-Smad1/5/8、sohlh2、c-kit及foxo3a表达的影响。采用RNA干扰技术、转染sohlh2质粒和LY294002处理，探讨BMP4/Smad信号通路在小鼠原始卵泡卵母细胞凋亡中的调控机制。结果 TUNEL 结果显示，BMP4组凋亡卵母细胞比例明显低于Con组（P＜0.05）和BMP4＋抑制剂组（P＜0.05）；加入BMP4可明显促进细胞Smad入核，上调 sohlh2和c-kit表达，抑制foxo3a入核；转染sohlh2 siRNA后，可明显阻断BMP4抑制卵母细胞凋亡的作用；转染sohlh2质粒后，p-foxo3a表达量显著增加，LY294002可明显抑制sohlh2促进foxo3a磷酸化的作用。结论激活BMP4/Smad信号通路可抑制小鼠原始卵泡卵母细胞的凋亡，其作用机制可能是通过上调sohlh2和c-kit基因表达，进而调控foxo3a入核而实现的。