含hITF基因cDNA的腺病毒载体的构建及其感染肠上皮细胞的研究

• 作者: 勒娟 孙勇 张方 潘晓峰 陈宝君
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 肠三叶因子 腺病毒 肠上皮细胞 基因治疗
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 795-799
• 页数: 5页
• 分类号: R379|R394.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201406013

摘要

目的 构建含有人肠三叶因子基因cDNA的腺病毒载体,并观察其对肠上皮细胞的感染能力.方法 利用PCR技术扩增hITF基因cDNA全长序列,测序后亚克隆至腺病毒穿梭质粒,转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1大肠杆菌株BJ5183感受态细胞中进行同源重组,内切酶PmeⅠ线性化后转染HEK293细胞进行病毒包装及扩增,并进行滴度测定.将重组腺病毒感染肠上皮细胞(HT-29),荧光显微镜观察感染效果.结果 成功构建出重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-hITF,Pme Ⅰ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1同源重组,Pac Ⅰ酶切鉴定后命名为Ad-hITF;重组腺病毒载体在HEK293细胞中包装,获得重组腺病毒颗粒;根据Karbers公式计算病毒颗粒滴度为2×109 pfu/mL;重组腺病毒可以感染肠上皮细胞(HT-29),感染效率较高.结论 成功构建含hITF基因cDNA的重组腺病毒载体并获得大量子代重组腺病毒,为腺病毒介导hITF基因治疗的应用打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘晓峰	中国人民解放军第九七医院烧伤科	4	15	2.0	3.0
2	孙勇	徐州医学院附属淮海医院烧伤科	18	70	5.0	7.0
3	勒娟	徐州医学院附属淮海医院烧伤科	2	2	1.0	1.0
4	张方	徐州医学院附属淮海医院烧伤科	3	2	1.0	1.0
5	陈宝君	中国人民解放军第九七医院烧伤科	1	0	0.0	0.0