海带配子体光捕获蛋白基因lhcf6的启动子克隆与鉴定

• 作者: 周志刚 宁璞 毕燕会
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 海带 配子体 lhcf6 启动子 GFP
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 页码范围: 62-68
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 5960字
• 语种: 中文

摘要

根据海带配子体光捕获蛋白基因lhcf6的cDNA全长序列(GenBank登录号：DQ250739)设计引物,利用基因组步移技术克隆得到其在雌、雄配子体中的5′-侧翼序列,长度分别为932,901 bp。测序结果比对显示二者相似度为33.3%,说明该基因在雌、雄配子体中具有不同的上游调控区。网络服务器PlantCARE和Softberry启动子元件预测结果表明,二者均含有TATA框、节律性相关元件MBS、光反应相关元件MNF1和GAG-motif,其中雌配子体lhcf6基因5′-侧翼序列还特有LHC基因特征元件AT-rich序列,雄配子体特有节律性相关元件Circadian元件,这些元件可能与该基因表达受光质、光强、节律性等因素的调控有关。将其与GFP报告基因一起构建融合表达载体pCAMBIA1304-Flhcf6和pCAMBIA1304-Mlhcf6,利用pCAMBIA1304作对照,通过电击转化法分别转化莱茵衣藻。激光共聚焦荧光显微镜检测结果显示,含pCAMBIA1304-Flhcf6和pCAMBIA1304-Mlhcf6的转基因藻体中GFP基因均有表达,说明克隆得到的海带雌、雄配子体lhcf6基因的5′-侧翼序列具有启动子功能。