pGEX-4T-3-MFGF21表达载体的构建、表达与纯化

• 作者: 唐青蓝 张礼林 李红梅 许庆忠 雷霆雯
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠成纤维细胞生长因子(FGF21) pGEX-4T-3 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-24
• 页数: 7页
• 分类号: R34|Q782|Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2014.02.0031

摘要

目的:构建小鼠FGF21(fibroblast growth factor 21,FGF21)重组表达载体pGEX-4T-3-MFGF21,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,纯化后获得小鼠FGF21融合蛋白.方法:提取小鼠肝脏总RNA后,经RT-PCR扩增获得目的片段,将其克隆至pMD19-T进行保存.以T载体为模板,扩增MFGF21 mat-peptide,构建重组原核表达载体pGEX-4T-3-MFGF21.将重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21 (DE3)中,在不同IPTG浓度、温度及转速下对表达载体进行诱导表达,优化表达条件,表达产物经SDS-PAGE电泳以鉴定是否为可溶性表达,采用亲和层析法纯化各表达产物后,进行Western blotting鉴定.结果:成功构建重组表达载体pGEX-4T-3-MFGF21,对其进行可溶性表达后成功纯化出GST-MFGF21,经Western-blotting鉴定为目的蛋白.结论:成功构建pGEX-4T-3-MFGF21,得到纯化的GST-MFGF21蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雷霆雯		34	151	8.0	10.0
2	许庆忠		15	108	8.0	10.0
3	李红梅		25	96	6.0	8.0
4	张礼林		4	1	1.0	1.0
5	唐青蓝		2	8	1.0	2.0