骨髓源性与脂肪源性间充质干细胞调节肝纤维化的功能比较

• 作者: 俞富祥 古妮 孙克龙 张启瑜 陈云志
• 来源期刊: 中华消化杂志
• 关键词: 肝硬化 骨髓间充质干细胞 脂肪间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 742-747
• 页数: 6页
• 字数: 5195字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-1432.2014.11.005

摘要

目的 比较大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)与脂肪间充质干细胞(ADSC)在调节肝纤维化方面的差异.方法 分别从Sprague-Dawley大鼠骨髓、脂肪分离纯化培养间充质干细胞,流式细胞仪检测干细胞表面标志.采用0.4 μm Transwell小室半透膜建立共培养体系,分别将第3代ADSC、BMSC与肝星状细胞(HSC)共培养,另将大鼠正常肝细胞系(BRL)与HSC共培养作为阴性对照组,单独HSC培养作为空白对照组.培养72 h,采用细胞计数试剂盒(CCK)-8比色法检测HSC增殖情况,Western印迹法检测HSC细胞的α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.流式细胞仪检测HSC凋亡情况.分别将BMSC、ADSC和BRL单独培养72 h,ELISA法测定培养液中血管内皮生长因子(VEGF)、IL-10、神经生长因子(NGF)及TGF-β1的浓度.建立大鼠肝纤维化模型,将大鼠分为BMSC治疗组、ADSC治疗组、阴性对照组和空白对照组,每组6只,BMSC治疗组、ADSC治疗组和阴性对照组分别经门静脉输注1.5 mL(5×106个)BMSC、ADSC、BRL细胞悬液,空白对照组输注等量无细胞培养液,2周1次,共4周.检测肝组织病理切片和肝纤维化指标.两样本均数间比较用t检验.多个样本均数间的比较用方差分析.结果 成功分离培养BMSC、ADSC.BMSC与ADSC在细胞表型上类似.ADSC共培养组和BMSC共培养组分别与空白对照组和阴性对照组相比,两者均能抑制HSC增殖、促进凋亡(空白对照组、阴性对照组、ADSC共培养组和BMSC共培养组增殖程度依次为2.43±0.27、2.39±0.33、1.92±0.38、2.18±0.31,FBMSC=25.61,FADSC=38.63,P均＜0.05;凋亡率依次为(5.59±0.40)％、(6.82±0.57)％、(8.31±1.03)％、(9.36±0.54)％,FBMSC=73.69,FADSC=97.41,P均＜0.05),且ADSC比BMSC作用更强(增殖,t=5.76;凋亡,t=5.18,P均＜0.05).ADSC与BMSC分泌的细胞因子水平也有所不同[NGF为(7.46±0.54) pg/mL比(3.95±0.71) pg/mL,t=10.92,P＜0.05; TGF-β1为(8.79±0.93) pg/mL比(6.36±0.85) pg/mL,t=7.58,P＜0.05].大鼠移植实验显示BMSC、ADSC对肝纤维化均具有明显抑制作用.BMSC治疗组、ADSC治疗组的肝脏炎症活动度和纤维化程度分别为9.87±2.07、4.17±0.94和10.13± 1.81、3.98±0.82,与空白对照组(13.78±2.53和5.09±1.15)和阴性对照组(13.34±1.89和4.95±1.22)相比明显降低(FBMSC=51.26和32.29,P＜0.05; FADSC =46.73和40.94,P＜0.05),BMSC治疗组及ADSC治疗组的血清透明质酸水平[(191.5±33.2) μg/L、(178.8±28.2)μg/L]、血清Ⅲ型胶原[(19.9±5.1)μg/L、(21.7±3.3)μg/L]和肝脏羟脯氨酸[(312.6±38.8)μg/g、(325.8±28.2)μg/g]含量均明显低于阴性对照组与空白对照组[透明质酸为(282.3±18.7) μg/L、(287.5±26.7)μg/L,F=73.51;Ⅲ型胶原为(35.3±3.3)μg/L、(32.5±4.3) μg/L,F=76.19;羟脯氨酸为(458.4±38.1)μg/g、(473.9±63.7) μg/g,F=60.37,P均＜0.05],但BMSC治疗组与ADSC治疗组间差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 BMSC与ADSC具有相似的干细胞特征.在抑制HSC活性方面,ADSC与BMSC有所不同,但在大鼠体内抑制肝纤维化方面差异无统计学意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张启瑜	温州医科大学附属第一医院肝胆胰外科	35	117	5.0	9.0
2	陈云志	温州医科大学附属第一医院肝胆胰外科	4	3	1.0	1.0
3	俞富祥	温州医科大学附属第一医院肝胆胰外科	19	40	4.0	5.0
4	孙克龙	温州医科大学附属第一医院肝胆胰外科	2	16	1.0	2.0
5	古妮	温州医科大学附属第一医院肝胆胰外科	4	5	1.0	1.0