蛋白酪氨酸激酶NOK/STYK1胞内区的表达与纯化

• 作者: 丁雪 吴放 姜清波 张淑平 李蕊 王琛
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: NOK/STYK1 蛋白表达和纯化 凝胶过滤层析
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 201-205
• 分类号: Q786|Q51
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2014.02.001

摘要

目的:酪氨酸蛋白激酶NOK/STYK1具有很强的促肿瘤形成和转移能力,被认为是很有前途的肿瘤治疗靶点.由于NOK含有一个跨膜区,且富含疏水性氨基酸,其表达和纯化非常困难,直接影响了对其功能及相关分子机理的深入研究.本研究目的是获得可溶的且纯度较高的NOK胞内区融合蛋白△NOK (AA:49-422),为后续抗体的制备和功能研究奠定重要基础.方法:含有△NOK基因的原核表达载体,转入E.coli BL21中,IPTG诱导蛋白表达,通过亲和层析获得可溶的△NOK融合蛋白.融合蛋白经凝血酶酶切后,凝胶过滤层析分离标签蛋白获得△NOK蛋白.同时,我们还通过Bac-to-Bac系统获得合有△NOK基因的杆状病毒,感染sf9细胞,尝试在真核细胞中表达目的蛋白.结果:通过在sf9昆虫细胞和大肠杆菌表达系统中盐浓度等各种条件的摸索,首次获得了可溶的且纯度较高的NOK胞内区融合蛋白(△NOK-GST)和一定量去除标签的△NOK蛋白.本研究中与大肠杆菌相比,昆虫细胞并不适合△NOK的纯化.结论:我们建立了一套优化的NOK蛋白表达和纯化体系,从而为后续抗体制备和各种体内外生化实验等功能研究奠定基础,为研究NOK在肿瘤中的作用和药物筛选创造条件.同时丰富了整个RTKs家族作用机制的探索,进一步促进了以RTKs为靶点的治疗手段在临床上的应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李蕊	生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
2	王琛	生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
3	吴放	生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
4	姜清波	生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
5	丁雪	生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
6	张淑平	生物膜与膜生物工程国家重点实验室清华大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0