γ-synuclein基因真核表达载体的构建及其对结肠癌细胞SW1116体外侵袭转移潜能的影响

• 作者: 叶青 王晓盈 许扬梅 郑秋红 黄丽洁 黄峰 龚福生
• 来源期刊: 中华胃肠外科杂志
• 关键词: 结肠癌细胞 基因,γ-synuclein 侵袭 黏附 人脐静脉内皮细胞
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 转化医学研究
• 页码范围: 36-40
• 页数: 5页
• 字数: 3692字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-0274.2014.01.008

摘要

目的 构建针对γ-synuclein基因的真核表达载体并观察其对结肠癌细胞SW1116体外侵袭及与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附能力的影响.方法 从结肠癌细胞系HT29提取总RNA,经RT-PCR获得γ-synuclein cDNA全长片段,经过酶切连接等反应定向克隆至真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1上,以脂质体转染的方法将重组质粒转染至结肠癌细胞系SW1116,经G418筛选出稳定转染的细胞株.采用Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力.将细胞接种于铺有HUVEC的96孔板中,酶标仪读取荧光强度来表示黏附细胞的相对数.结果 成功构建pEGFP-γ-synuclein真核表达载体,经过筛选后可在SW1116细胞中稳定表达,且能在体外翻译出GFP-γ-synuclein融合蛋白质.转染γ-synuclein后,穿过Matrigel胶及Transwell小室膜的细胞数明显增加(198.4±20.7比98.8±13.2,P＜0.05),与HUVEC黏附的细胞数(荧光强度)亦显著增加(3.08±0.36比1.22±0.21,P＜0.05).结论 γ-synuclein可显著增强结肠癌细胞SW1116体外侵袭转移潜能.