沉默PLCε1基因对食管癌Eca109细胞凋亡和侵袭的影响及其作用机制

• 作者: 周荣秒 李宾 李琰 牛朝旭 王娜 霍向然 黄茜
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 食管肿瘤 C型磷脂酶类 RNA干扰 细胞凋亡 侵袭
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1102-1108
• 页数: 7页
• 分类号: R737.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2014.11.423

摘要

目的:研究沉默磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon 1,PLCε1)基因对食管癌Eca109细胞凋亡和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用阳离子脂质体法将构建有特异性针对PLCε1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体(pGenesil-1-PLC e 1-shRNA1、pGenesi1-1-PLCε1-shRNA2和pGenesil-1-PLCε1-shRNA3)转入Eca109细胞,并筛选出干扰效果最好的表达载体.分别采用FCM和Transwell小室法于PLCε1-shRNA转染48 h后检测PLCε1基因沉默后对Eca109细胞凋亡和侵袭能力的影响.半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测PLCε1基因沉默后Eca109细胞中自杀相关因子(factor-associated suicide,Fas)及其配体FasL (Fas ligand)、CD44、基质金属蛋白酶9 (matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA表达的改变.结果:PLCε1-shRNA2对PLCε1基因的干扰效果最好.PLCε1-shRNA2转入Eca109细胞48 h后,PLCε1-shRNA2组Eca109细胞的凋亡率为(30.27±5.13)％,明显高于阴性对照组的(22.06±4.47)％(P＜0.05);阴性对照组和PLCε1-shRNA2组穿过Transwell小室聚碳酸酯膜的Eca109细胞数分别为(82.00±2.00)个和(62.67±3.06)个,PLCε1-shRNA2组穿过Transwell小室膜的细胞数明显低于阴性对照组(P＜0.05).PLCε1-shRNA2组Eca109细胞中Fas mRNA的表达水平较阴性对照组明显上调(P＜0.05),而FasL、MMP-9和VEGF mRNA的表达水平均较阴性对照组明显下调(P均＜0.05),CD44 mRNA的表达水平未发生改变.结论:沉默PLCε1基因的表达可能通过上调Fas的表达和下调FasL的表达而促进Eca109细胞的凋亡;并通过下调MMP-9和VEGF的表达抑制Eca109细胞的侵袭能力.