实时荧光定量RT-PCR快速检测四种呼吸道病毒的研究

• 作者: 向蕾 吕星 房师松 王昕 陆家海 陈仕菊
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人腺病毒 人博卡病毒 人偏肺病毒 人呼吸道合胞病毒 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 461-465
• 分类号: R446.1
• 语种: 中文

摘要

目的 利用实时荧光定量RT-PCR建立快速检测人腺病毒(HADV)、人博卡病毒(HBoV)、人偏肺病毒(HMPV)、人呼吸道合胞病毒(HRSV)等四种呼吸道病毒的方法.方法 寻找四种呼吸道病毒的相对保守序列,针对该序列分别设计4对引物对及其相应的Taqman探针,将此保守序列作为目的基因片段,使用一步法RT-PCR试剂盒建立、优化反应体系;采用10倍稀释体外转录RNA,检测建立的体系的灵敏度和重复性并建立反应体系标准曲线;通过临床样本检验体系的特异性.结果 HADV、HBoV、HMPV、HRSV四种病毒的检测灵敏度均为10 copies/μl,标准曲线的决定系数分别为:HADV R2=0.9998,HBoV R2=0.9981,HMPV R2=0.9981,HRSV R2=0.9947和0.9965,扩增效率分别为:HADV 105.08％,HBoV 107.81％,HMPV 102.08％,HRSV FAM荧光106.38％及CY5荧光107.95％.荧光RT-PCR反应体系检测体外转录的RNA的各个拷贝数浓度的变异系数均较低,对临床样本检验的特异性为100％.结论 本研究建立的实时荧光定量RT-PCR体系可快速、准确地检测人HADV、HBoV、HMPV、HRSV等四种呼吸道病毒,且重复性较好,特异性高.