过表达Claudin-5增强体外培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能

• 作者: 刘秋慧 李静 王菁 田蓉 罗燕 肖伟 蔡萌
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人视网膜血管内皮细胞 Claudin-5 紧密连接 屏障功能 慢病毒转染
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 695-701
• 页数: 7页
• 分类号: R34
• 字数: 4647字
• 语种: 中文

摘要

[目的]探讨过表达Claudin-5后对视网膜血管内皮细胞屏障功能的影响.[方法]体外原代培养人视网膜血管内皮细胞(hRVEC).当接种至transwell膜的P2～P5代hRVEC近60％融合时进行慢病毒介导的转染实验.hRVEC分为对照组,慢病毒空载体组,慢病毒介导的Claudin-5高表达转染组.荧光活细胞动态显微镜观察慢病毒介导的转染效率.Western Blot检测各组细胞中Claudin-5表达水平.CCK8法检测病毒转染对细胞的毒性.待接种至transwell膜的hRVEC培养2周后建立稳定的单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型后,电阻仪检测hRVEC屏障的跨内皮电阻(TER),异硫氰酸荧光素右旋糖酐检测hRVEC屏障的通透性.[结果]慢病毒可以介导Claudin-5在hRVEC高表达,其转染率达60％,Western Blot检测证实Claudin-5蛋白表达显著增加.CCK8检测表明慢病毒转染不影响细胞的活性,对细胞毒性小;过表达Claudin-5后也不影响hRVEC的增殖;过表达Claudin-5后能降低体外单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型的通透性,并提高其TER.[结论]过表达Claudin-5后可以显著提高体外人视网膜血管内皮细胞屏障的功能,这为视网膜血管性疾病的治疗提供新思路.