大鼠视网膜微血管周细胞的选择性培养

• 作者: 刘光辉 刘安 孟春 徐朝阳 黄以鹏 黄陈稳
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 视网膜 微血管 周细胞 分离 纯化 培养 鉴定
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 18-22
• 页数: 5页
• 字数: 4630字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2014.01.004

摘要

背景 视网膜微血管周细胞(RMPs)在糖尿病视网膜病变(DR)等视网膜新生血管性疾病中的作用日益受到重视,并被视为潜在的治疗靶点.然而因组织材料来源受限及细胞分离纯化不易,RMPs体外研究工作的开展受到了限制. 目的 建立简便的大鼠RMPs分离、培养和纯化方法.方法 摘取清洁级健康雄性SD大鼠的眼球,置于体积分数75％乙醇中浸泡1 min,用眼科显微手术器械分离获取视网膜并将其剪成碎片,依次用2.5 g/L胰蛋白酶和2 g/L Ⅰ型胶原酶各消化15 min,消化后分别过直径100 μm和55 μm滤网,收集视网膜消化后的微血管片段,用含有体积分数20％胎牛血清的低糖型DMEM接种于6孔板,至培养14 ～ 16 d细胞达到80％～90％融合时进行消化传代,培养和传代期间通过换液法及差异消化法去除杂质细胞.用倒置相差显微镜观察细胞的形态和生长状态,用免疫荧光法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血小板源性生长因子受体-β(PDGFR-β)、von Willebrand因子(vWF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,以鉴定RMPs. 结果 RMPs在接种后24 ～ 48 h自微血管片段中迁移出,7d后形成中等大的细胞集落,14～ 16 d后达到80％ ～ 90％融合状态.RMPs传代后生长速度加快,至12～14 d达到融合.形态学鉴定显示,培养的细胞呈宽大、扁平、不规则形并伴多个突起的典型周细胞形态特征,且传代至第9代形态特征无明显变化.免疫荧光法检测显示,所培养的细胞均不表达内皮细胞特异性标志物vWF,约96％的细胞对周细胞标志物α-SMA或PDGFR-β抗体呈阳性反应,极少量细胞对胶质细胞特异性标志物GFAP抗体呈阳性表达. 结论 本实验成功建立了一种简单、经济的大鼠RMPs分离、纯化、培养方法,可以获得理想的高纯度RMPs.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘安	福建中医药大学附属人民医院眼科	41	248	9.0	14.0
2	徐朝阳	福建中医药大学附属人民医院眼科	24	101	7.0	9.0
3	刘光辉	福建中医药大学附属人民医院眼科	34	138	8.0	11.0