弓形虫RH株热应激蛋白40基因的克隆与原核表达

• 作者: 周东辉 张念章 朱兴全 殷铭阳 王瑞爱 田维鹏 翁亚彪 路静
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 弓形虫 HSP40蛋白 克隆 原核表达 反应原性
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 页码范围: 73-77
• 页数: 5页
• 分类号: S852.723
• 语种: 中文

摘要

为研究弓形虫热应激蛋白40(TgHSP40)的生物学特性,采用RT-PCR方法从弓形虫RH株中扩增出TgHSP40基因片段,并将其克隆到原核表达载体pET-30a(+)后转化入表达菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,应用Western-blot对重组蛋白的反应原性进行分析.结果显示,重组菌可表达出分子质量约46 ku的重组融合蛋白,在37℃、IPTG浓度为1.0 mmol/L、诱导6h的情况下表达效果最好.重组蛋白经纯化后进行的Western-blot分析证实,表达、纯化的弓形虫RH株HSP40蛋白具有良好的反应原性,与弓形虫基因Ⅰ型的RH株、基因Ⅱ型的PRU株以及基因型为ToxoDB9的TgC7株和GJS株的阳性血清均可发生特异性反应,预期可作为弓形虫病ELISA诊断方法的候选抗原.本研究结果为弓形虫病新型诊断方法的建立奠定了基础.