抑制miR-221表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 傅斌 刘仁升 张霞丽 王义兵 王共先 许晓源 郎斌 郝超 黄亮
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 膀胱肿瘤 微RNAs 细胞增殖 细胞凋亡 miR-221 细胞,T24,J82
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 879-887
• 页数: 9页
• 分类号: R737.14
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2014.11.311

摘要

目的:探讨抑制微RNA (microRNA,miRNA,miR)-221表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:将化学合成的miR-221抑制片段has-miR-221 inhibitor和miR-221抑制阴性无意义片段(阴性对照组)(has-miR-221 inhibitor negative control)转染至膀胱癌T24和J82细胞中,转染5h后,在荧光显微镜下观察转染效率;实时荧光定量PCR法检测转染48 h后,T24和J82细胞中miR-221的表达情况;MTT法检测转染24、48和72 h后,T24和J82细胞的增殖情况;RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染48 h后,T24和J82细胞中p53上调凋亡调控因子(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)、Bax和Bcl-2 mRNA及蛋白的表达;FCM法和吖啶橙(acridineorange,AO)-溴化乙锭(ethidium bromide,EB)染色检测转染48 h后,T24和J82细胞的凋亡情况.结果:Has-miR-221 inhibitor转染至T24和J82细胞的效率分别为80％和90％.Has-miR-221 inhibitor转染后,T24和J82细胞中miR-221的表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(只加入转染试剂)(P＜0.05);转染后T24和J82细胞的增殖抑制率高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),且呈时间依赖性;转染组PUMA和BaxmRNA及蛋白的表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05); has-miR-221 inhibitor转染组T24和J82细胞的凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论:抑制miR-221的表达可抑制膀胱癌细胞的增殖,并促进其凋亡.