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可条件性诱导PLK1稳定敲降的食管癌细胞株的建立
可条件性诱导PLK1稳定敲降的食管癌细胞株的建立
作者:
ZHANG Yu
刘洋
张钰
曹迎亚
王明荣
蔡岩
车轶群
郝佳洁
陈群
马文韬
鲁卫华
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
PLK1
shRNA
诱导表达
慢病毒载体
食管癌
摘要:
目的:建立可条件性诱导PLK1-shRNA稳定表达的食管癌细胞株,为深入研究PLK1在食管癌发生发展中的作用及分子机制提供细胞模型。方法:合成PLK1-shRNA寡核苷酸,退火后连接到慢病毒表达载体pLKO-Tet-On并转化至感受态细胞Stbl3,利用菌落PCR和测序分析鉴定阳性重组子。用pLKO-shPLK1-Tet-On重组质粒和包装质粒共转染293T细胞,收集病毒上清,感染食管癌细胞KYSE510,利用嘌呤霉素筛选可诱导PLK1-shRNA稳定表达的细胞株。采用qRT-PCR和Western blot检测强力霉素(Dox)诱导PLK1-shRNA表达的效率。结果:菌落PCR和测序分析结果显示,pLKO-shPLK1-Tet-On重组质粒中PLK1-shRNA的序列及插入位点正确。包装、收获病毒并感染KYSE510细胞后,筛选获得了具有嘌呤霉素抗性的稳定细胞株KYSE510-shPLK1-Tet-On。qRT-PCR和Western blot的检测结果显示,0.1μg/mL Dox即可显著下调KYSE510-shPLK1-Tet-On细胞中PLK1的表达。结论:成功构建了诱导型PLK1-shRNA慢病毒表达载体,并筛选获得了可条件性诱导PLK1稳定敲降的食管癌细胞株,为进一步探讨PLK1异常表达与食管癌发生发展的关系提供了理想的细胞模型。
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文献信息
篇名
可条件性诱导PLK1稳定敲降的食管癌细胞株的建立
来源期刊
癌变·畸变·突变
学科
生物学
关键词
PLK1
shRNA
诱导表达
慢病毒载体
食管癌
年,卷(期)
2014,(5)
所属期刊栏目
论 著
研究方向
页码范围
348-352
页数
5页
分类号
Q782
字数
4039字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1004-616x.2014.05.006
五维指标
传播情况
被引次数趋势
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(/年)
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引文网络
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(16)
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研究主题发展历程
节点文献
PLK1
shRNA
诱导表达
慢病毒载体
食管癌
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
癌变·畸变·突变
主办单位:
中国环境诱变剂学会
出版周期:
双月刊
ISSN:
1004-616X
CN:
44-1063/R
开本:
大16开
出版地:
广东省汕头市新陵路22号汕头大学医学院内
邮发代号:
80-285
创刊时间:
1989
语种:
chi
出版文献量(篇)
2510
总下载数(次)
3
总被引数(次)
11449
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