中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱

• 作者: 刘振国 吉挺 吴黎明 梁勤 沈芳 罗岳雄
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 中华蜜蜂 OBP3基因 基因克隆 原核表达 组织表达谱 抗体制备
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 897-904
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

[目的]气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)参与气味分子的识别,在蜜蜂嗅觉中扮演重要的角色.本研究旨在克隆中华蜜蜂Apis cerana cerana OBP3基因,以制备多克隆抗体.[方法]运用RT-PCR技术从中华蜜蜂头部总RNA中扩增OBP3基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a并转入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta (DE3)中诱导表达获得融合蛋白质,融合蛋白质经纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western Blot检测抗体的效价和特异性,并采用荧光定量PCR检测OBP3基因在中蜂不同组织中的表达.[结果]克隆得到了中华蜜蜂OBP3基因AccOBP3(GenBank登录号KJ026357),大小为444 bp.SDS-PAGE结果显示融合蛋白成功表达.制备的多克隆抗体效价高于1∶40000,且具有很高的特异性.荧光定量PCR结果表明,AccOBP3基因在腿部和触角中显著高表达(P＜0.01),胸部中次之(P＜0.01),头部和腹部中显著低表达,后两者表达量差异不显著(P＞0.05).[结论]OBP3基因在中蜂触角有高转录活性.本研究实现了中蜂OBP3基因的原核表达,并制备了兔抗中蜂OBP3多克隆抗体,为深入研究中蜂OBP3基因的功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吉挺	扬州大学动物科学与技术学院	75	313	9.0	12.0
2	罗岳雄		33	63	5.0	6.0
3	梁勤	福建农林大学蜂学院	53	286	9.0	13.0
4	吴黎明	中国农业科学院蜜蜂研究所	69	416	10.0	17.0
5	刘振国	扬州大学动物科学与技术学院	8	29	4.0	5.0
6	沈芳	扬州大学动物科学与技术学院	8	29	4.0	5.0