罗非鱼源无乳链球菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与原核表达

• 作者: 吴灶和 李桂欢 汤菊芬 王蓓 简纪常 鲁义善 黄郁葱
• 来源期刊: 水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 无乳链球菌 甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 175-180
• 页数: 6页
• 分类号: S917.1
• 字数: 4309字
• 语种: 中文

摘要

为对罗非鱼源无乳链球菌ZQ0910株甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因进行克隆及表达进行研究，根据GenBank上已登录的相关基因设计引物，采用 PCR方法扩增该株细菌的甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因，然后将其定向克隆至原核表达载体pET-32a（＋）中，在大肠杆菌BL21（DE3）中进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达。结果显示，甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因有1011个碱基，编码336个氨基酸；同源基因序列比对显示，无乳链球菌ZQ0910株与无乳链球菌2603V/R的甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的同源性最高；经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达后，SDS-PAGE电泳显示甘油醛-3-磷酸脱氢酶蛋白表达的最优条件为：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷浓度为0．06 mmol/L、温度37℃、诱导5 h ，蛋白表达量最大；HisTrap HP柱纯化后融合蛋白的质量浓度为560μg/mL ；Western Blot验证甘油醛-3-磷酸脱氢酶的分子量为36．01 ku。研究结果表明，成功克隆与表达了甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因，这将为进一步研究甘油醛-3-磷酸脱氢酶的免疫原性及亚单位疫苗提供理论依据。