慢病毒载体介导SPROUTY2基因过表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖作用的影响

• 作者: 夏丹丹 姚瑶 徐开林 曾令宇 潘彬 牛铭山 赵恺 边月平
• 来源期刊: 白血病·淋巴瘤
• 关键词: 多发性骨髓瘤 慢病毒载体 RPMI8226 SPROUTY2 细胞外调节蛋白激酶
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 658-663
• 页数: 6页
• 字数: 4474字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9921.2014.11.004

摘要

目的 探讨慢病毒表达载体介导的人SPROUTY2基因过表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖、克隆性生长和细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂敏感性等生物学特性的影响.方法 克隆人SPROUTY2基因,构建SPROUTY2基因与绿色荧光蛋白(GFP)的重组慢病毒表达载体LV-S-GFP及对照载体LV-GFP.脂质体法包装病毒;优化慢病毒感染RPMI8226细胞的条件;荧光显微镜观察GFP表达;反转录聚合酶链反应(PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)方法分别检测目的基因及其蛋白的表达,CCK-8法检测RPMI8226细胞增殖及其对ERK 1 /2抑制剂AS703026敏感性的影响,软琼脂克隆形成实验检测细胞的克隆性生长能力.结果 成功地构建了共表达SPROUTY2基因和报告GFP的高滴度慢病毒颗粒.LV-S-GFP实验组RPMI8226细胞中SPROUTY2的表达明显高于LV-GFP对照组,灰度值分别为(230.85±32.12)％和(140.35±36.62)％(P＜ 0.05).过表达SPROUTY2基因对骨髓瘤细胞增殖具有抑制作用,并可以增强ERK1/2抑制剂AS703026对RPMI8226细胞的杀伤作用.过表达SPROUTY2基因可明显抑制RPMI8226细胞的克隆性生长.结论 慢病毒载体系统可高效介导SPROUTY2基因在RPMI8226细胞中的表达,抑制骨髓瘤细胞增殖及克隆性生长,并能够提高其对ERK抑制剂的敏感性.