奶山羊超长链脂肪酸延伸酶6基因(ELOVL6)的克隆及其对4个脂肪酸代谢基因表达水平的影响

• 作者: 史怀平 吴敏 姚大为 孙雨婷 朱江江 李君 罗军
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 奶山羊 超长链脂肪酸延伸酶6(ELOVL6) 组织表达 超表达
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 672-680
• 页数: 9页
• 字数: 6590字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.06.002

摘要

超长链脂肪酸延伸酶6(elongase of very long chain fatty acids 6,ELOVL6)是长链脂肪酸延长反应的限速酶.本研究旨在通过对奶山羊(Capra hircus)ELO VL6基因的克隆、组织表达分析以及腺病毒(Adenovirus)介导的超表达技术,研究该基因超表达后对乳腺上皮细胞中脂肪酸代谢相关基因的影响.利用RT-PCR技术克隆了奶山羊ELOVL6基因的CDS区;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测该基因在泌乳期奶山羊10个组织中的相对表达量;构建该基因的重组腺病毒超表达载体,包装出高滴度的腺病毒并感染奶山羊原代乳腺上皮细胞,qRT-PCR检测LOVL6超表达效果及其对脂肪酸代谢相关基因的影响.结果表明,ELOVL6基因CDS区序列长度为795 bp(GenBank登录号:KF667508),共编码264个氨基酸.同源分析发现,奶山羊LO VL6基因CDS区核酸序列与牛(Bos taurus)、大鼠(Rattus norvegicus)和人(Homo sapiens)的同源性分别为97％、90％和93％,氨基酸序列同源性分别为99％、92％、95％.利用TMpred对ELOVL6蛋白跨膜结构预测分析,发现该蛋白有5个跨膜区,保守的组氨酸模体(HXXHH)位于ELOVL6蛋白的第二与第三跨膜螺旋间.ELOVL6蛋白质疏水性预测显示,该蛋白总体具有较强的疏水性.组织表达分析显示,ELOVL6基因在脂肪组织中表达量最高(P＜0.01),小肠次之(P＜0.01),心脏中表达量最低.超表达ELOVL6基因的重组腺病毒的滴度为108 U/mL,病毒液感染原代乳腺上皮细胞48h后,ELOVL6基因的表达量上升约200倍;脂肪酸代谢相关基因检测分析发现,固醇调节元件结合蛋白-1基因(SREBP-1)的表达量显著下降(P＜0.05),脂肪分化相关蛋白基因(ADRP)的表达量显著升高(P＜0.05),过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因(PPARγ)及脂肪酸转位酶基因(CD36)的表达量无明显变化.研究结果表明,ELOVL6基因可以影响奶山羊乳腺上皮细胞脂肪酸代谢相关基因的表达,对乳腺脂肪酸代谢具有一定的调控作用.本研究为ELOVL6基因在奶山羊乳腺脂肪酸代谢调控中的功能研究提供研究依据.