羟基喜树碱联合依托泊苷对人Tenon囊成纤维细胞凋亡的影响及其机制

• 作者: 于东毅 傅煜轩 姚志峰 袁志兰
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 羟基喜树碱 依托泊苷 人Tenon囊成纤维细胞 凋亡 协同作用 细胞培养/体外
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 125-130
• 页数: 6页
• 字数: 5694字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2014.02.006

摘要

背景 研究表明,羟基喜树碱(HCPT)和依托泊苷(VP-16)均能诱导人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的凋亡,但这两种药物联合应用对体外培养的HTFs是否有协同作用尚不明确. 目的 观察HCPT与VP-16联合应用后在促进体外培养的HTFs凋亡方面是否有协同性,并探讨其作用机制. 方法 人眼Tenon囊成纤维组织取自江苏省人民医院眼库,采用组织块培养法培养和传代HTFs,采用免疫组织化学法检测HTFs中波形蛋白的表达.第4代HTFs接种于96孔板,分别将不同质量浓度的HCPT(1、5、10、50、100 mg/L)、VP-16 (0.6、2.5、5.0、25.0、50.0 mg/L)、HCPT+VP-16(质量比为2:1,终质量浓度分别为0.80、3.75、7.50、37.50、75.00 mg/L)加入细胞培养孔处理24 h,用CCK-8法检测各组药物对细胞增生的抑制率.将HTFs分为空白对照组、HCPT(50 mg/L)处理组、VP-16(25 mg/L)处理组、HCPT+VP-16(37.5 mg/L)处理组,药物处理24 h后用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率.提取细胞内总蛋白,采用Western blot法检测各药物处理组细胞内caspase-3、活化型caspase-3、bax、bel-2、JNK、p-JNK、Akt、p-Akt的表达水平. 结果 培养的细胞呈多边形或不规则形,波形蛋白表达阳性.不同质量浓度HCPT、VP-16和HCPT+VP-16作用24 h后,随着药物质量浓度的增加,对HTFs增生的抑制率增加,差异均有统计学意义(HCPT:F=41.34,P=0.00；VP-16:F=62.60,P=0.00；HCPT+VP-16:F=46.77,P=0.00),HCPT处理组、VP-16处理组和HCPT+VP-16处理组药物的半数抑制浓度(IC50)分别为80.99、27.93、19.81 mg/L,HCPT与VP-16联合应用的合并指数(CI)为0.399,表明VP-16和HCPT具有强协同作用.空白对照组、HCPT处理组、VP-16处理组和HCPT+VP-16处理组HTFs的凋亡率分别为(4.87±0.78)％、(11.20±1.94)％、(12.67±1.51)％和(19.77±2.0l)％,差异有统计学意义(F=18.23,P＜0.01),其中HCPT处理组、VP-16处理组和HCPT+VP-16处理组HTFs凋亡率较空白对照组明显升高,差异均有统计学意义(q'=15.67、16.32、26.88,P＜0.01).Western blot法检测结果表明,与空白对照组相比,HCPT处理组、VP-16处理组和HCPT+VP-16处理组HTFs中活化型caspase-3、bax、p-JNK表达的灰度值明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.01),且HCPT+VP-16处理组HTFs中上述各因子表达的灰度值较HCPT处理组、VP-16处理组明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.01),而caspase-3、JNK、Akt的表达无明显变化.与空白对照组比较,bcl-2、p-Akt在HCPT处理组、VP-16处理组和HCPT+VP-16处理组HTFs中的表达量明显下降,HCPT+VP-16处理组较HCPT处理组、VP-16处理组的表达量明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 单独使用HCPT、VP-16均能诱导体外培养的HTFs凋亡,其作用均呈剂量依赖性,HCPT与VP-16联合应用有强协同作用.HTFs中p-JNK、bax的表达上调和p-Akt、bcl-2表达的下调参与联合用药引起的协同效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁志兰	南京医科大学第一附属医院眼科	73	292	8.0	12.0
2	姚志峰	南京医科大学第一临床医学院	21	38	3.0	4.0
3	于东毅	南京医科大学第一临床医学院	2	7	1.0	2.0
4	傅煜轩	南京医科大学生理学实验室	1	1	1.0	1.0