利用λRed重组系统敲除鼠伤寒沙门氏菌sopB基因

• 作者: 张坤生 张西轩 李晔 王素英 郭梦征 阮海华
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 鼠伤寒沙门氏菌LT2 λRed 重组系统 sopB 基因敲除 同源重组
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 171-177
• 语种: 中文

摘要

利用λRed重组系统敲除鼠伤寒沙门氏菌LT2的(Salmonella enterica serovar typhimurium LT2,S.typhimurium LT2)sopB基因.以pKD4质粒为模板,扩增得到中间带有卡那霉素抗性基因且两端各带有59 bp分别与sopB基因上下游序列同源的同源打靶片段,将其转化至表达Red重组酶的S.typhimurium LT2感受态细胞中;在抗生素压力和λRed重组系统帮助下,同源片段和菌体sopB基因发生同源重组,通过卡那霉素筛选得到带有抗性标记的阳性重组菌;转入重组酶表达质粒pCP20以除去抗性标记,得到保留单一FRT位点的突变菌株;利用PCR技术鉴定重组菌,并通过检测沙门氏菌效应蛋白SopB的分泌以及沙门氏菌感染HeLa细胞后pAKT的激活反应来鉴定sopB基因是否被敲除.构建的ΔsopB突变菌株失去了分泌SopB蛋白的能力,且不能够像野生型菌株那样在感染HeLa细胞的过程中激活pAkt.本研究获得了S.typhimurium LT2的sopB基因缺失突变株,为沙门氏菌感染宿主过程中SopB的功能研究提供工具,同时也为进一步探索其他类型细菌的基因敲除提供了线索.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王素英	天津商业大学生物技术与食品科学学院天津市食品生物技术重点实验室	70	408	11.0	17.0
2	张坤生	天津商业大学生物技术与食品科学学院天津市食品生物技术重点实验室	55	189	8.0	12.0
3	郭梦征	中国医学科学院放射医学研究所	3	11	2.0	3.0
4	李晔	天津商业大学生物技术与食品科学学院天津市食品生物技术重点实验室	3	19	3.0	3.0
5	张西轩	天津商业大学生物技术与食品科学学院天津市食品生物技术重点实验室	3	19	3.0	3.0