CTLA4.FasL免疫抑制效应及对肝前体细胞增殖分化潜能的影响

• 作者: 万真 吕毅 张晓刚
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: CTLA4.FasL 肝前体细胞 异种免疫排斥反应 增殖 分化
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 147-151,162
• 页数: 6页
• 分类号: R392.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201402002

摘要

目的 探讨融合蛋白CTLA4.FasL对肝前体细胞(LEPCs)增殖分化潜能的影响及抑制异种排斥反应的效应.方法克隆CTLA4.FasL基因,构建携带CTLA4.FasL基因与红色荧光蛋白(mCherry)双顺反子结构的重组慢病毒载体Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry.优化慢病毒感染LEPCs的条件,建立高表达CTLA4.FasL的LEPCs,荧光显微镜观察mCherry的表达,Western blot检测CTLA4.FasL的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定细胞培养上清中CTLA4.FasL的浓度,水溶性四氮唑(WST-1)法检测细胞的增殖活性,Real time PCR(RT-PCR)检测干细胞相关基因CK19和c-Kit mRNA的表达,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)掺入法测定CTLA4.FasL-LEPCs在异种混合淋巴细胞培养体系中对大鼠淋巴细胞增殖的抑制作用.结果 构建重组慢病毒载体Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry,病毒滴度为2×108 TU/mL.在感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10,聚凝胺质量浓度是5μg/mL时,感染效率约90%.Western blot证实了CTLA4.FasL的表达,在细胞培养上清中其质量浓度约为(0.72±0.10)μg/mL.CTLA4.FasL-LEPCs细胞增殖活性未受到影响,CK19和c-Kit基因mRNA表达水平无变化.CTLA4.FasL-LEPCs细胞可显著抑制大鼠淋巴细胞的增殖(P<0.05).结论 构建成功的重组慢病毒载体Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry可介导CTLA4.FasL基因在LEPCs中高效表达;CTLA4.FasL可有效地抑制异种排斥反应,同时不损害LEPCs增殖活性和分化潜能.