大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中巨噬细胞浸润及表型研究

• 作者: 宋菲 嵇晓芸 曹晓赞 牛轶雯 缪明远 董叫云 陆树良
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 伤口愈合 巨噬细胞 表型
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 创面修复的基础与临床研究
• 页码范围: 109-115
• 页数: 7页
• 字数: 4996字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2014.02.004

摘要

目的 研究大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中巨噬细胞的浸润及表型变化. 方法 取30只健康SD大鼠,按随机数字表法分为损伤组24只、对照组6只.损伤组大鼠于脊柱两侧用自制环钻及手术剪制成2个直径为11 mm的全层皮肤缺损创面,致伤后即刻测量创面面积,每日碘伏消毒;对照组大鼠仅行麻醉脱毛处理.伤后1、3、7、13 d,分别取损伤组6只大鼠测量创面面积(计算创面愈合率)后处死,沿创缘切取创面组织达健康筋膜层,HE染色观察组织学表现,免疫组织化学染色观察组织中巨噬细胞表面标志物CD68表达,免疫荧光染色分别观察组织中CD68与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)双阳性(Ⅰ型巨噬细胞)、CD68与精氨酸酶1(Arg-1)双阳性(Ⅱ型巨噬细胞)表达情况,双抗体夹心ELISA法检测创面组织中γ干扰素、TNF-α、IL-4、IL-13、IL-10和IL-12的水平并计算IL-10/IL-12比值.对照组大鼠在与损伤组相同部位切取直径为11 mm的全层正常皮肤组织,同前行组织学及细胞因子检测.对数据行单因素方差分析或LSD-t检验. 结果 损伤组大鼠伤后创面逐渐缩小,伤后各时相点创面愈合率总体比较差异有统计学意义(F=358.55,P＜0.01).对照组大鼠皮肤组织形态未见异常.损伤组大鼠伤后1、3d,创面组织中炎性细胞明显浸润;伤后7、13d,可见明显血管腔结构、新生胶原.对照组大鼠正常组织和损伤组大鼠伤后1、3、7、13d创面组织每200倍视野下的CD68阳性细胞数分别为(2.7±1.5)、(31.8±3.5)、(40.8±4.7)、(20.8±2.8)、(3.2±2.4)个(F=180.55,P＜0.01).损伤组大鼠伤后1、3、7 d CD68阳性细胞数明显高于对照组(t值分别为18.81、18.79、14.05,P值均小于0.01).对照组大鼠正常组织中未见CD68与iNOS双阳性或者CD68与Arg-1双阳性细胞.损伤组大鼠伤后1、3、7、13 d CD68与iNOS双阳性细胞百分比分别为(12.2±2.8)％、(16.5±2.9)％、(4.2±2.3)％、(0.7±0.8)％(F=72.50,P＜0.01),CD68与Arg-1双阳性细胞百分比分别为0、(8.2±1.9)％、(21.5±3.4)％、(4.7±2.0)％(F=120.93,P＜0.01).损伤组大鼠伤后3 d CD68与iNOS双阳性细胞百分比显著高于组内其他时相点(t值分别为2.65、8.17、12.95,P值均小于0.05),伤后7 d CD68与Arg-1双阳性细胞百分比显著高于组内其他时相点(t值分别为15.27、8.25、10.38,P值均小于0.01).CD68与iNOS双阳性细胞百分比于伤后1、3d显著高于CD68与Arg-1双阳性细胞百分比(t值分别为10.71、5.88,P值均小于0.01),伤后7、13d则显著低于CD68与Arg-1双阳性细胞百分比(t值分别为10.24、4.60,P值均小于0.01).对照组大鼠正常组织及损伤组大鼠伤后各时相点创面组织中γ干扰素、TNF-α、IL-4、IL-13水平及IL-10/IL-12比值总体比较,差异均有统计学意义(F值为14.08 ～631.03,P值均小于0.01).与对照组比较,损伤组大鼠伤后各时相点创面组织中γ干扰素、TNF-α、IL-4和IL-13水平均显著增高(t值为4.58～ 9.17,P值均小于0.05),伤后1、3、7 d IL-10/IL-12比值明显增高(t值分别为27.70、30.51、9.49,P值均小于0.05).损伤组大鼠伤后1dγ干扰素水平[(61±5) pg/mL]及伤后3 d IL-10/IL-12比值(1.647 ±0.098),显著高于对照组及损伤组其余时相点[γ干扰素水平依次为(32±4)、(54±6)、(46±7)、(47 ±4) pg/mL,IL-10/IL-12比值依次为0.328±0.045、0.960±0.034、0.530±0.028、0.289±0.040,t值分别为3.19 ～ 8.20、16.59 ～31.84,P值均小于0.05]. 结论 大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中巨噬细胞浸润明显增加并呈现不同表型,其中Ⅰ型巨噬细胞出现在炎症期,而增殖期以Ⅱ型巨噬细胞为主.