乳腺生物反应器特异高效表达载体的构建

• 作者: 张敬之 张斯敏 张金脉 方彧聃 高越
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 乳腺生物反应器 Cre/loxP系统 特异表达 报告基因lacZ
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 49-55
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20140708

摘要

乳腺生物反应器具有广阔的开发前景,而提高目的基因的表达量是该领域一个重要的研究课题.因此,选用强的非特异性启动子pCAG,而不是乳腺特异性启动子来实现高效表达;通过Cre/loxP系统和山羊β-乳球蛋白启动区(pBLG)表达Cre重组酶来实现载体的自删除以达到乳腺特异表达的目的.方法:构建含PolyA终止信号的Cre乳腺特异表达元件PolyA-pBLG-cre,插至强启动子pCAG驱动的报告基因lacZ表达载体中,构建成乳腺特异表达载体pCBCZ(pCAG-loxP-PolyA-pBLG-cre-loxP-lacZ).转染细胞实验结果:PCR鉴定确认pCBCZ载体在小鼠乳腺上皮细胞(HC11)中发生Cre-loxP同源重组.X-Gal染色表明载体能驱动lacZ在HC11细胞中高效表达β-半乳糖苷酶,而在NIH 3T3细胞中仅少量表达.结论:构建的pCBCZ载体能高效驱动外源基因在乳腺细胞中表达,且具有较好的乳腺特异性,为研发乳腺生物反应器表达载体提供新的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方彧聃	上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院上海交通大学医学遗传研究所	6	24	3.0	4.0
3	高越	上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院上海交通大学医学遗传研究所	2	4	1.0	2.0
4	张斯敏	上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院上海交通大学医学遗传研究所	1	3	1.0	1.0
7	张金脉	上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院上海交通大学医学遗传研究所	1	3	1.0	1.0