炭疽芽胞杆菌mntA基因缺失突变株的构建及鉴定

• 作者: 万秀坤 刁立鹏 刘纯杰 杨百亮 王艳春 袁盛凌 陶好霞
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 炭疽芽胞杆菌 mntA基因 温敏质粒 同源重组 Cre-LoxP系统
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 341-344
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3582字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.03.008

摘要

目的:通过同源重组的方法敲除炭疽芽胞杆菌减毒AP422株的mntA基因,使菌株进一步减毒,用于构建新的疫苗候选株.方法:利用PCR方法扩增mntA基因上下游同源臂后与温敏质粒连接,构建打靶载体,并转化炭疽芽胞杆菌减毒AP422株;利用抗生素和温度2种选择压力实现同源重组,敲除目标基因mntA,然后利用Cre-LoxP系统去除抗性筛选标记,得到无抗性标记的缺失突变株,并利用PCR和Western印迹等方法对重组菌进行系统鉴定,最后分析突变株的生物学性状.结果:敲除了AP422株的mntA基因,获得了无抗性标记的缺失突变株,突变株的生存竞争能力比原始菌株明显减弱.结论:突变株获得了进一步减毒,可用于构建新的疫苗候选株.