人神经菌毛素-1基因重组腺病毒的构建及鉴定

• 作者: 王林 耿智敏 郑见宝 陈强
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: NRP-1基因 重组腺病毒载体 肿瘤微环境
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 技术方法研究
• 页码范围: 415-418
• 页数: 4页
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201403028

摘要

目的：构建含有人神经菌毛素-1(NRP-1)基因和3 Flag标签蛋白基因的腺病毒载体，为研究该基因对肿瘤细胞与其周围间质细胞的相互作用的影响提供实验基础。方法应用AgeⅠ和NheⅠ限制性内切酶酶切含有人 NRP-1基因的质粒，再将其与酶切线性化的 pDC315-3 Flag 载体片段连接，构建穿梭质粒 pDC315-NRP-1-3 Flag；应用腺病毒骨架质粒 pBHGlox△E13Cre与此穿梭质粒共转染 HEK293细胞，产生重组腺病毒，进而对重组腺病毒进行扩增、纯化及滴度测定；用PCR和基因测序方法验证穿梭质粒 pDC315-NRP-1-3Flag 的构建；再通过荧光显微镜和 Western blot方法，分别检测质粒 pDC315-NRP-1-3Flag和重组腺病毒转染 HEK293细胞后 NRP-1蛋白的表达情况。结果经PCR和测序分析，证实穿梭质粒 pDC315-NRP-1-3 Flag与设计一致；穿梭质粒 pDC315-NRP-1-3 Flag 和重组腺病毒分别转染 HEK293细胞后，经 Western Blot均检测出在95~130 ku处有条特征带，其大小和 NRP-1-3Flag 融合蛋白(104 ku)相吻合；滴度测定为2.00E+11PFU/mL。结论成功构建了人 NRP-1基因重组腺病毒载体，并能在HEK293细胞中表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	耿智敏	西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科	97	475	12.0	16.0
2	郑见宝	西安交通大学医学院第一附属医院普通外科	48	185	7.0	10.0
3	王林	西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科	85	433	12.0	16.0
4	陈强	西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科	42	267	11.0	14.0