酿酒酵母YBR019C 基因缺失突变的分析

• 作者: 孙靓 李检秀 郭铃 陆琦 陈东 黄日波 黄艳燕 龙思宇
• 来源期刊: 广西科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 酿酒酵母 YBR 019C 基因敲除 甘蔗糖蜜 乙醇
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 酶学与微生物应用
• 页码范围: 108-114
• 页数: 7页
• 分类号: Q933
• 字数: 6039字
• 语种: 中文

摘要

【目的】研究目的基因YBR 019C 缺失对酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）菌株糖代谢和乙醇发酵的影响。【方法】以酿酒酵母野生菌 NF1002为出发菌株，选择2号染色体上的基因 YBR 019C 为目的基因，以质粒pUG6和 pUG66为模板进行 PCR，构建带有 Cre/loxP 系统的酿酒酵母YBR 019C 基因敲除组件，并转化酿酒酵母 NF1002，利用筛选标记 Kan r和 Ble r与YBR 019C 基因进行同源重组，筛选YBR 019C 双倍体缺陷型菌株。利用蔗糖和甘蔗糖蜜为碳源，对突变菌进行发酵特性的研究。【结果】成功获得YBR 019C 双倍体缺陷型菌株 NF-ybr。碳源同化实验表明，突变株和野生菌均能利用葡萄糖和蔗糖，不能利用乳糖和木糖；但相比野生菌，突变株利用棉子糖和麦芽糖的能力有所下降，而且完全不能利用半乳糖。蔗糖发酵实验表明：突变株 NF-ybr 与野生菌株相比，在发酵终点乙醇浓度提高10．7％，发酵周期有所延长。按目前甘蔗糖蜜乙醇生产的发酵工艺，突变株在30℃发酵72h 的醪液乙醇含量为12．52％，低于野生菌的13．89％。【结论】YBR 019C 基因的缺失影响了菌株对糖份的利用，导致乙醇发酵能力不及野生菌。本研究为菌株高效快捷的基因改造提供了参考。