利用优化的5'-RACE实验定位副溶血弧菌基因的转录起始位点

• 作者: 周冬生 张义全 李杰 王丽 胡小许 高鹤
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 副溶血弧菌 5'-cDNA末端快速扩增 转录起始位点
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 328-332
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3883字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.03.005

摘要

目的:优化5'-cDNA末端快速扩增(5’-RACE)实验平台,用于定位副溶血弧菌(VP)基因的转录起始位点.方法:提取VP的总RNA,用rDNase Ⅰ消化去除可能污染的基因组DNA;利用T4RNA连接酶将已知序列的寡核苷酸片段连接至RNA的5’端,进而将其逆转录成cDNA;以cDNA为模板,采用巢式PCR技术扩增目的基因DNA片段,并将其直接克隆入T载体;最后通过测序比对的方法确定靶基因的转录起始位点.利用引物延伸实验进一步研究VPA1027的转录起始位点,以检验5’-RACE实验结果的可靠性.结果:5’-RACE实验结果表明,VPA1027、scrG、scrA、cpsA及VPA0198的转录起始位点分别为G(-103)、G(-70)、T(-205)、C(-129)和G(-238)(翻译起始位点为+1);引物延伸结果显示,VPA1027的转录起始位点也为G(-103).结论:优化后的5'-RACE实验可以精确定位VP基因的转录起始位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张义全	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	9	17	3.0	3.0
2	王丽	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	2	3	1.0	1.0
3	胡小许	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	1	3	1.0	1.0